细胞培养条件

尊龙凯时推荐的细胞培养环境为：气相中包含95%空气和5%二氧化碳，培养温度设置在37℃。使用的培养基为F12K，配比为10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）。

细胞系简介

本细胞系由DJGriad通过肺癌组织移植建立，患者为58岁白人男性。A549细胞能够通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。

细胞传代方法

传代时，如果细胞汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，放入37℃、5%CO2的培养箱培养；当细胞密度超过80%时，即可进行传代。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%的胰蛋白酶约1-2ml于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变化。如果细胞大部分变圆并脱落，迅速将培养瓶取出，轻敲几下后加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基进行重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 进行半换液处理，将培养瓶竖直放置1小时，轻吸掉3ml培养基，补充3ml新鲜完全培养基，如培养基颜色较慢，可直接加入500μl FBS。
2. 如需分瓶，可将细胞悬液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml培养液重悬，按1:2比例分瓶培养，最后添加6-8ml新鲜完全培养基。

细胞冻存与复苏

细胞冻存步骤

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml于培养瓶中，观察细胞状态，直至细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化。然后轻吹使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冷藏24小时以上，随后可转入液氮罐中保存。

细胞复苏步骤

1. 从液氮中取出冻存管，快速置入37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶，之后用75%酒精消毒冻存管外壁。
2. 将冻存管内细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀的细胞用5ml完全培养基重悬，再接种至T25培养瓶中，放于37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

总结：细胞培养及其复苏过程需在无菌条件下进行，保持细胞环境的稳定至关重要。使用尊龙凯时品牌产品，可以确保培养条件的精准和细胞的健康成长。